| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 靶点 |
pan-KRAS (KD = 6.9, 4.5, 32, 26, 4.3 nM for WT, G12C, G12D, G12V and G13D mutant KRAS, respectively)
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| 体外研究 (In Vitro) |
BI-2865 是端口氨基醇取代基和标记的端子引脚连接等效物。 BI-2865 的 E62 和 R68 侧链（5 天）与 BI-2865 具有直接的离子连接，如 BI-2865 与 KRAS 结合的共晶结构所证明。当 IL-13 存在时，G12C、G12D 或 G12V 表达受到抑制。具有突变 KRAS 的 BaF3 细胞在生长过程中由平均 IC50 和 Q61 主链位置形成的水介导的氢键网络 [1]。在 140 nM 附近。
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| 体内研究 (In Vivo) |
BI-2865提高了紫杉醇在P-gp过表达异种移植物中的体内疗效[2]
为了进一步测试BI-2865在体内损害MDR的能力，将建立的过表达P-gp的KBv200细胞皮下移植到3周龄的雌性BALB/C裸鼠体内。当肿瘤体积接近100mm3时，我们将小鼠随机分为四组，每两天给药一次。结果显示，在单独用生理盐水、15mg/kg紫杉醇或30mg/kg BI-2865治疗的小鼠中分析的肿瘤生长没有统计学上的显著差异，而紫杉醇和BI-2865的联合给药显著抑制了肿瘤体积和重量的生长，而不会损害小鼠的体重增加（图2A-D）。总的来说，这些结果证实，BI-2865可以显著增强紫杉醇在体内P-gp过表达介导的MDR异种移植物中的治疗效果。 研究人员发现，BI-2865显著增强了P-gp驱动的MDR癌症细胞对包括紫杉醇、长春新碱和阿霉素在内的化疗驱动药物的反应，而在其亲代敏感细胞和BCRP或MRP1驱动的多药耐药细胞中未观察到这种作用。重要的是，小鼠体内联合研究证实，BI-2865有效地提高了紫杉醇的抗肿瘤作用，而没有毒性损伤。在机制上，BI-2865通过直接阻断P-gp的外排功能来促进阿霉素在癌细胞中的积累，更具体地说，这是通过BI-2865与P-gp的药物结合位点竞争性结合来实现的。更重要的是，在有效的MDR逆转浓度下，BI-285既不改变P-gp的表达和位置，也不降低其下游AKT或ERK1/2信号活性 结论：本研究揭示了BI-2865作为MDR调节剂的新应用，可用于有效、安全和特异性地提高临床P-gp介导的MDR难治性癌症的化疗疗效。[2] |
| 酶活实验 |
RAS激活试验[1]
使用活性RAS下拉和检测试剂盒检测RAS活性。简而言之，将GST-RAF1 RBD和谷胱甘肽琼脂糖树脂与全细胞裂解物混合，在4°C下在旋转器上孵育1小时，然后洗涤三次，用2×SDS-PAGE加载缓冲液洗脱。然后通过SDS-PAGE和KRAS特异性抗体（2F2，Sigma）的蛋白质印迹分析样品。当表位标记的KRAS、NRAS和/或HRAS变体外源表达时，表位特异性抗体能够特异性测定这些变体在GTP结合构象中的表达。 ITC[1] 在MicroCal PEAQ-ITC仪器上进行了泛KRASi（BI-2865）的量热实验。通过透析将蛋白质溶液交换到含有20mM HEPES pH 7.6、130mM氯化钠、2mM氯化镁和0.5mM TCEP的缓冲液中。所有测量均在23°C下进行。将滴定剂和滴定仪浓度调节至3%DMSO。细胞装载了0至40μM范围内的蛋白质溶液。所有注射均使用0.5μl的初始注射，然后19次注射2μl的100-500µM范围内的化合物。使用MicroCal PEAQ-ITC分析软件包（v.1.1.0.1262）对数据进行分析。第一个数据点被排除在分析之外。热力学参数由以下公式计算：ΔG=ΔH−TΔS=−RTlnKd，其中ΔG、ΔH和ΔS分别是自由能、焓和结合熵的变化，T是温度，R是通用气体常数（补充图2）。 表面等离子体共振[1] 在Biacore 8K仪器上进行了表面等离子体共振实验。使用10 mM HBS-P+缓冲液（pH 7.4）在25°C下将链霉抗生物素蛋白固定在CM5芯片上。使用400 mM 1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）-碳二亚胺和100 mM N-羟基琥珀酰亚胺活化表面（接触时间420 s，流速10 ml min−1）。将链霉抗生物素蛋白在10 mM乙酸钠（pH 5.0）中稀释至终浓度为1 mg ml−1，并注射600秒。随后通过注射1 M乙醇胺使表面失活420秒，并通过注射50 mM NaOH和1 M NaCl进行调节。使用不含DMSO的运行缓冲液稀释生物素化靶蛋白和链霉抗生物素蛋白偶联。靶蛋白以0.1 mg ml-1的浓度制备，并偶联至200至800个反应单位的密度。所有相互作用实验均在25°C下在运行缓冲液（20 mM三羟甲基氨基甲烷、150 mM氯化钾、2 mM氯化镁、2 mM三羧乙基膦盐酸盐、0.005%吐温20、40μM鸟苷5′-二磷酸、pH 8.0、1%DMSO）中进行。将化合物在运行缓冲液中稀释，并注射到固定的靶蛋白上（KRAS突变体的浓度范围为6.25-1000 nM）。在使用Biacore Insight软件进行数据分析之前，从原始数据中减去参考表面和空白注射的传感器图。亲和力和结合动力学参数是通过使用1/1相互作用模型确定的，其中包括传质项。 P-gp ATP酶测定[2] 如前所述，通过比色法评估P-gp ATP酶的活性。从过表达P-gp的High Five昆虫细胞中分离出粗膜。在pH 6.8的缓冲液（由50 mM KCl、2 mM EDTA、10 mM MgCl2、1 mM DTT和5 mM叠氮化钠组成）中，将粗膜蛋白（100µg蛋白/mL）与不同剂量的BI-2865（0-5µM）在37°C下孵育5分钟。然后加入Mg ATP溶液（5 mM）以启动ATP水解，反应在37°C.下保持20分钟。随后，加入30µL的10%SDS溶液以终止反应。随后加入检测试剂（含有10%抗坏血酸、15 mM醋酸锌和35 mM钼酸铵），在37°C下再孵育20分钟，然后通过96孔Fisher Scientific Multiskan FC微孔板读数器在750 nm处测量混合物的吸光度。无机磷酸盐的释放在标准曲线上定量。最终的BI-2865刺激的P-gp ATP酶激活被定义为在Na3VO4存在和不存在的情况下ATP释放的无机磷酸盐量之间的变化。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定和细胞增殖测定[1] 个体癌症细胞系[1] 将细胞接种在96孔板中，每孔2000个细胞，一式三份（至少），并用指定浓度的BI-2865处理。72小时后，通过CellTiter-Glo发光细胞活力测定法测定细胞活力。从原始数据中减去背景值（无细胞培养基），计算相对于时间零点的倍数变化。 同源BaF3细胞[1] 简而言之，BaF3细胞用来自表达KRAS G12C、G12D或G12V突变体的质粒（pMSCV KRAS PGK-Puro-IRES-GFP）的病毒转导。通过荧光激活细胞分选监测转导效率。在嘌呤霉素（1µg ml-1）和Il-3（10 ng ml-1）中选择细胞1-2周，或直至对照细胞死亡。随后，伊尔-3被撤回，并在伊尔-3缺席的情况下进行了几次飞行。通过测序证实了外源性KRAS的整合。为了确定药物治疗对增殖的影响，将1500个细胞接种在60µl罗斯威尔公园纪念研究所培养基（10%FCS）的384孔板中，并在37°C下过夜。如上所述测定细胞活力。 274细胞系面板高通量筛选[1] 简而言之，将细胞接种在黑色384孔组织培养板中的25μl生长培养基中，密度为相应细胞系定义的密度，并在处理前将培养板置于37°C、5%CO2下24小时。在治疗时，收集了一组未接受治疗的测定板，并使用CellTiter Glo v.2.0和Envision平板阅读器上的发光读数测量了ATP浓度。使用Echo声学液体处理系统将BI-2493（结构上类似于BI-2865的类似物）转移到分析板上。将测定板与化合物一起孵育5天，然后使用CellTiter Glo进行分析。所有数据点都是通过自动化流程收集的，并经过质量控制，使用Horizon的专有软件进行分析。Horizon使用生长抑制作为细胞生长的衡量标准。通过应用以下测试和方程式计算生长抑制百分比：如果T |
| 动物实验 |
用于体内研究的抑制剂是结构与BI-2865相似的类似物（BI-2493），剂量为90 mg/kg，每日两次。采用灌胃法给药，给药量为10 ml/kg。由一名不知晓研究目的的研究技术人员使用游标卡尺以非盲法测量对照组和治疗组的平均肿瘤直径（测量肿瘤的两个垂直轴）。数据分析采用Prism（GraphPad Software）软件进行。本文所述的泛KRAS抑制剂（GDP-KRAS抑制剂）可通过勃林格殷格翰的开放创新门户网站opnMe.com参与合作项目：https://opnme.com/collaborate-now/GDP-KRAS-inhibitor-bi-2493。[1]
采用MTT法检测了BI-2865的体外细胞毒性及其多药耐药（MDR）清除效果，并通过P-gp介导的KBv200小鼠异种移植模型评估了其体内相应的逆转作用。采用荧光标记的阿霉素流式细胞术实验评估了BI-2865诱导的细胞药物释放和储存的变化，并通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）分析了异种移植瘤中化疗药物的积累情况。通过钒酸盐敏感型ATPase活性测定、[125I]-IAAP光标记测定和计算机分子对接分析了BI-2865抑制P-gp底物外排的机制。采用Western blotting、流式细胞术和/或qRT-PCR检测了BI-2865对P-gp表达和KRAS下游信号通路的影响。采用免疫荧光法观察了P-gp的亚细胞定位。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
KRAS是癌症中最常见的突变蛋白之一，数十年来人们一直在努力直接抑制其功能。其中最成功的方法是开发共价等位基因特异性抑制剂，这些抑制剂能够将KRAS G12C捕获在其非活性构象中，从而抑制患者的肿瘤生长1-7。非活性状态选择性抑制是否可用于治疗非G12C KRAS突变体仍有待研究。本文报道了一种非共价抑制剂的发现和表征，该抑制剂能够优先且高亲和力地结合KRAS的非活性状态，同时不影响NRAS和HRAS。尽管RAS亚型GTPase结构域的氨基酸残基数量有限，但其进化差异足以赋予KRAS选择性正构和变构限制。该抑制剂阻断核苷酸交换，从而抑制野生型KRAS和多种KRAS突变体（包括G12A/C/D/F/V/S、G13C/D、V14I、L19F、Q22K、D33E、Q61H、K117N和A146V/T）的激活。下游信号传导和增殖的抑制仅限于携带突变型KRAS的癌细胞，且该药物治疗可抑制小鼠体内KRAS突变肿瘤的生长，而不会对动物体重产生不利影响。我们的研究表明，大多数KRAS癌蛋白在癌细胞中于活性状态和非活性状态之间循环，并且其激活依赖于核苷酸交换。泛KRAS抑制剂（例如本文所述的抑制剂）具有广泛的治疗意义，值得在KRAS驱动型癌症患者中进行临床研究。[1]
背景：多药耐药性（MDR）限制了癌症化疗的成功。 P-糖蛋白 (P-gp)、BCRP 和 MRP1 是多药耐药 (MDR) 的关键触发因子。遗憾的是，迄今为止，尚无 MDR 调节剂获得 FDA 批准。本研究将探讨泛 KRAS 抑制剂 BI-2865 在体外和体内逆转 P-gp、BCRP 和 MRP1 诱导的 MDR 的作用及其逆转机制。 方法：采用 MTT 法检测 BI-2865 的细胞毒性及其体外 MDR 清除效果，并通过 P-gp 介导的小鼠 KBv200 异种移植瘤模型评估其体内相应的逆转作用。采用荧光标记阿霉素的流式细胞术实验评估 BI-2865 对细胞药物释放和储存的影响，并通过液相色谱-质谱联用 (LC-MS) 分析异种移植瘤中化疗药物的积累情况。通过钒酸盐敏感型ATPase活性测定、[125I]-IAAP光标记测定和计算机分子对接分析了BI-2865抑制P-gp底物外排的机制。采用Western blotting、流式细胞术和/或qRT-PCR检测了BI-2865对P-gp表达和KRAS下游信号通路的影响。通过免疫荧光法观察了P-gp的亚细胞定位。结果：我们发现BI-2865显著增强了P-gp驱动的多药耐药（MDR）癌细胞对包括紫杉醇、长春新碱和阿霉素在内的化疗药物的反应，而这种作用在亲代敏感细胞以及BCRP或MRP1驱动的MDR细胞中未观察到。重要的是，小鼠体内联合用药研究证实，BI-2865能有效增强紫杉醇的抗肿瘤作用，且无毒副作用。在机制上，BI-2865通过直接阻断P-gp的外排功能，促进阿霉素在癌细胞中的积累。更具体地说，BI-2865是通过与P-gp的药物结合位点竞争性结合实现的。此外，在有效的MDR逆转浓度下，BI-2865既不改变P-gp的表达和定位，也不降低其下游AKT或ERK1/2信号通路的活性。 结论：本研究揭示了BI-2865作为MDR调节剂的新应用，该调节剂可能用于有效、安全、特异性地提高临床P-gp介导的MDR难治性癌症的化疗疗效。[2] |
| 分子式 |
C23H27N7O2S
|
|---|---|
| 分子量 |
465.571182489395
|
| 精确质量 |
465.19
|
| 元素分析 |
C, 59.34; H, 5.85; N, 21.06; O, 6.87; S, 6.89
|
| CAS号 |
2937327-93-8
|
| 相关CAS号 |
2937327-93-8
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| PubChem CID |
168268166
|
| 外观&性状 |
Light yellow to brown solid
|
| 密度 |
1.38±0.1 g/cm3(Temp: 20 °C; Press: 760 Torr)(Predicted)
|
| 沸点 |
708.7±70.0 °C(Predicted)
|
| LogP |
4.1
|
| tPSA |
155
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
752
|
| 定义原子立体中心数目 |
3
|
| SMILES |
C12CCC[C@](C)(C3ON=C(C4=NC=CC(O[C@H]([C@@H]5CCCN5C)C)=N4)N=3)C=1C(C#N)=C(N)S2
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| InChi Key |
MIUFORKWYHBPRW-HMFCALDFSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H27N7O2S/c1-13(15-6-5-11-30(15)3)31-17-8-10-26-20(27-17)21-28-22(32-29-21)23(2)9-4-7-16-18(23)14(12-24)19(25)33-16/h8,10,13,15H,4-7,9,11,25H2,1-3H3/t13-,15-,23-/m0/s1
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| 化学名 |
(4S)-2-amino-4-methyl-4-[3-[4-[(1S)-1-[(2S)-1-methylpyrrolidin-2-yl]ethoxy]pyrimidin-2-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-6,7-dihydro-5H-1-benzothiophene-3-carbonitrile
|
| 别名 |
BI-2865; BI2865; BI-2865; 2937327-93-8; SCHEMBL26167321; BI 2865
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~250 mg/mL (536.98 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1479 mL | 10.7395 mL | 21.4790 mL | |
| 5 mM | 0.4296 mL | 2.1479 mL | 4.2958 mL | |
| 10 mM | 0.2148 mL | 1.0740 mL | 2.1479 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
KRAS G12C Ligand-Linker Conjugates 1
ACBI-4
KRASG12D-IN-7
VVD-442
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